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親和素類型介紹
更新時間:2011-09-02   點擊次數(shù):1508次

親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每個分子由4個亞基組成,可以和4個生物素分子親密結合。

親合素主要包括卵白親合素、鏈親合素、卵黃親合素及類親合素等。后兩種因其特異性親合力低,研究不多,前兩種目前已深入研究并得到廣泛應用:
1.親和素(Avidin,A):親合素又稱卵白蛋白或抗生物素,分子量為68000,pI 10~10.5;在pH9~13緩沖液中性質均穩(wěn)定,耐熱并耐多種蛋白水解酶的作用。天然親合素為堿性蛋白,由4個相同的亞單位構成4聚體;每個親合素亞單位通過其結構中的色氨酸殘基與生物素中的Ureido環(huán)(I環(huán))結合。因此,1個親合素分子存在4個與生物素分子結合位點,其結合常數(shù)(Ka)高 達1015mol/L。通常,親合素的活性單位是以親合素結合生物素的量來表示的,即以能結合1Pg生物素所需要的親合素量為1個親合素活性單位。一般1Pg親合素約含13~15個活性單位。

2.鏈霉親合素(Streptavidin,SA):鏈霉親合素(SA)是與親合素(A)有類似生物學特性的一種蛋白質。是由Streptomyces avidin菌在培養(yǎng)過程中分泌的一種蛋白質產(chǎn)物,SA也可通過基因工程手段生產(chǎn)。SA分子量為65000,由4條序列相同的肽鏈構成,每條SA肽鏈可以結合1個生物素分子。因此與A一樣,每個SA分子也具有4個可與生物素分子結合位點,其結合常數(shù)與A相同為1015mol/L。約為抗原抗體間ka(105~1011 mol/L)的1萬倍以上。SA與A的ka雖然相同,但在實際應用中其檢測靈敏度明顯優(yōu)于A,其原因是SA為 略偏酸性的蛋白。SA的每條肽鏈含159個氨基酸殘基,其中賴氨酸、精氨酸等堿性氨基酸的含量比一般親合素少,反之含酸性氨基酸較多,其等點為6.0,較A(pI=10)為低,同時在結構中SA不含任何糖基,而A含糖可高達10%。A的高pI及高含糖結構導致在聚苯乙烯板和硝酸纖維素膜上或與組織細胞DNA結合時,易產(chǎn)生一定程度的非特異性結合,造成較高的顯色背景,而SA較A在應用中明顯克服了這一缺點。SAzui高的活性可達18u,較A高(15u);與A一樣,每個SA分子也具有4個可與生物素分子結合位點,故其效應相同。

 

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