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溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定勝敗zui為要害的一個(gè)要素。也是zui簡略出現(xiàn)問題的一個(gè)過程。通常目前國內(nèi)ELISA產(chǎn)品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37 ℃ 30分鐘～1小時(shí)，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37 ℃ 1～2小時(shí)才華有較*的結(jié)合，低于1小時(shí)，或許會(huì)影響測(cè)定下限。因此，關(guān)于溫育，在實(shí)踐測(cè)定操作中必定要留意以下幾點(diǎn)：
（1）要保證在設(shè)定的溫度下有滿意的反應(yīng)時(shí)間。一般來說，加完樣本和/或反應(yīng)試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí)，孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃，需求必定的時(shí)間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時(shí)間或許還比較長，而在臨床實(shí)驗(yàn)室中，很少有人留意這個(gè)問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開端計(jì)時(shí)，這樣就很簡略構(gòu)成實(shí)踐測(cè)定中溫育時(shí)間不行，弱陽性樣本測(cè)不出來的問題。曾有一地處南邊的血站同行提出了一個(gè)問題，就是在每一年的冬天總有那么一個(gè)多月的時(shí)間，在做HBsAg測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控中，測(cè)定由衛(wèi)生部臨床查驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時(shí)，總是測(cè)不出來，不知原因?yàn)楹?？這或許就與南邊冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān)，此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37 ℃溫育時(shí)間不行，致使弱陽性樣本測(cè)定為陰性。因此，為保證37 ℃下滿意的溫育時(shí)間，臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)（不同室溫下）微孔板從室溫拿至溫箱后需求多長時(shí)間孔內(nèi)溫度才華達(dá)到37 ℃，然后恰當(dāng)延伸板條在溫箱中的放置時(shí)間。具體的做法是，用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測(cè)量觀察即可。
（2）溫育溫度的挑選。在有的ELISA試劑盒的闡明書中，指出溫育溫度可有兩種，例如，一種是37 ℃下1小時(shí)，另一種則為43 ℃下45分鐘。從免疫測(cè)定的抗原抗體反應(yīng)的實(shí)質(zhì)來看，在較低的溫度下反應(yīng)較長的時(shí)間zui為*。如2～8 ℃下反應(yīng)24小時(shí)。較高的反應(yīng)溫度，因?yàn)榉肿舆\(yùn)動(dòng)的加憐惜，反應(yīng)時(shí)間縮短，這一點(diǎn)對(duì)分子含量較多的強(qiáng)陽性樣本的測(cè)定沒有問題，但對(duì)分子含量少的弱陽性樣本則有漏檢的或許。因此，咱們主張?jiān)谂R床ELISA測(cè)定中盡量運(yùn)用較低溫育溫度較長反應(yīng)時(shí)間的條件。
（3）“邊緣效應(yīng)”的打掃。曾經(jīng)在運(yùn)用96孔板的ELISA測(cè)定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”，即外周孔顯色較中心孔深，發(fā)生這種“邊緣效應(yīng)”的原因或許為 96孔板周孔與中心孔外表或熱力學(xué)特征的不同。但有研討證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度或許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的慣例 ELISA測(cè)定中，將板從室溫（通常在25 ℃左右）置于37 ℃溫箱，板也升溫時(shí)，在外周孔與中心孔之間或許存在一熱力學(xué)梯度。因此運(yùn)用水浴或在將反應(yīng)溶液參加至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37 ℃），就可以很簡略地打掃“邊緣效應(yīng)”，而且可進(jìn)步測(cè)定的重復(fù)性。
                             
    總而言之，在ELISA測(cè)定中，要保證好的測(cè)定效果，可選用上述簡略方法來保證溫育條件，即盡量選用水浴，溫育中讓微孔板浮于水面上，或?qū)⒔杆纳巢挤湃胍淮箫埡兄谐梢粷窈?，放于溫箱中，這樣就會(huì)因?yàn)榘鍡l孔底部直接與37 ℃水或濕布的接觸，以及水浴箱或濕盒內(nèi)的高溫度，而使反應(yīng)溶液的溫度敏捷與溫室平衡。