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ELISA試劑盒規(guī)范品的稀釋與加樣
更新時(shí)間:2018-01-08   點(diǎn)擊次數(shù):1721次

1.ELISA試劑盒在酶標(biāo)包被板上設(shè)規(guī)范品孔10孔,在、第二孔中別離加規(guī)范品100μl,然后在、第二孔中加規(guī)范品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl別離加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔別離加規(guī)范品稀釋液50μl,ELISA試劑盒混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl別離加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中別離加規(guī)范品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl別離加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中別離加規(guī)范品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中別離取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔別離加規(guī)范品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度別離為30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。
2. 加樣:ELISA試劑盒別離設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其他各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,ELISA試劑盒然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗刷液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
5. 洗刷:當(dāng)心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔參加酶標(biāo)試劑50μl,空白孔在外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動(dòng)混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11.ELISA試劑盒測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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