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探針種類
更新時間:2010-06-04   點擊次數(shù):8591次

分子雜交基因探針根據(jù)標記方法不同可粗分為放射性探針和非放射性探針兩大類,根據(jù)探針的核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針,RNA探針,cDNA探針,cRNA探針及寡核苷酸探針等幾類,DNA探針還有單鏈和雙鏈之分。下面分別介紹這幾種探針。

)DNA探針
  是zui常用的核酸探針,指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現(xiàn)已獲得DNA探針數(shù)量很多,有細菌、病毒、原蟲、真菌、動物和人類細胞DNA探針。

(二)cDNA探針
  cDNAcomplementaryDNA)是指互補于mRNADNA分子。cDNA是由RNA經(jīng)一種稱為逆轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscriptase)的DNA聚合酶催化產(chǎn)生的,這種逆錄酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒時發(fā)現(xiàn)的。該酶以RNA為模板,根據(jù)堿基配對原則,按照RNA的核苷酸順序合成DNA(其中UA配對)。

(三)RNA探針  

RNA探針是一類很有前途的核酸探針,由于RNA是單鏈分子,所以它與靶序列的雜交反應(yīng)效率*。早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細胞基因轉(zhuǎn)錄或病毒復(fù)制過程中得到標記的,標記效率往往不高,且受到多種因素的制約。

(四)寡核酸探針
  前述三種探針均是可克隆的,一般情況下,只要有克隆的探針,就不用寡核苷酸探針。在DNA序列未知而必須首先進行克隆以便繪制酶譜和測序時,也常應(yīng)用克隆。克隆探針一般較寡核苷酸探針特異性強,復(fù)雜度也高,從統(tǒng)計學(xué)角度而言,較長的序列隨機碰撞互補序列的機會較短序列少,克隆探針的另一優(yōu)點是,可獲得較強的雜交信號,因為克隆探針較寡核苷酸探針摻入的可檢測標記基因更多。但是,較長的探針對于靶序列變異的識別能力又有所降低。對于僅是單個堿基或少數(shù)堿基不同的兩序列,克隆探針不能區(qū)分,往往雜交信號相當。這既是其優(yōu)點,又是其缺點。優(yōu)點是當用于檢測病原微生物時,不會因或細菌DNA的少許變異而漏診,缺點則是不能用于點突變的檢測。這種情況下,通常要采用化學(xué)合成的寡核苷酸探針。

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